Causes of equine abortion, stillbirth, and perinatal mortality in Brazil / Causas de abortamento, natimortalidade e mortalidade em equinos no Brasil

Abortion and complications in reproduction are important causes of economic loss in horse breeding. Studies of its causal agents can help to identify the primary pathogens or other factors involved and define appropriate measures to reduce its occurrence. This research aimed to investigate the primary causes of equine abortion, stillbirth, and perinatal mortality in regions of Brazil. Tissue from aborted fetuses, stillbirths, neonates and foals submitted to the Biological Institute of São Paulo, Brazil, from January 2010 to July 2013 were processed for viral and bacterial isolation, polymerase chain reaction (PCR), histology, and immunohistochemistry. Bacterial infection was the primary detected cause of abortion, found in 16 of the 53 animals submitted for bacterial analysis followed by viruses analysis in 2 of 105 animals, and noninfectious causes (neonatal isoerythrolysis) in 2 of 105 animals. Fungi were found in a single sample of 53 tested. The most frequent bacteria recovered were Escherichia coli, Enterobacter aerogenes, combined E. coli and Streptococcus spp., Staphylococcus spp., and Bacillus spp. The following agents were each observed in a single sample: Arcanobacterium pyogenes, Streptococcus spp., Corynebacterium spp., Actinobacillus spp., and Rhodococcus equi. The predominant identification of fecal and other opportunistic bacteria as opposed to pathogens commonly associated with equine abortion, such as Leptospira spp. and equine herpesvirus type 1 (EHV-1), suggests the need of improving hygiene management of breeding mares to prevent bacterial infection that may cause fetal loss, stillbirth, and perinatal mortality.(AU)

Abortamento e complicações na reprodução são importantes causas de perda econômica na equideocultura. Estudos dos agentes causais podem ajudar a identificar patógenos ou outros fatores envolvidos e definir medidas apropriadas para reduzir sua ocorrência. Esta pesquisa investigou as causas primárias de aborto, natimortalidade e mortalidade perinatal em equinos de diversas regiões do Brasil. Tecidos de fetos abortados, natimortos e potros submetidos ao Instituto Biológico de São Paulo, Brasil, no período de janeiro de 2010 a julho de 2013, foram processados por meio de técnicas de isolamento viral e bacteriano, PCR, histologia e imuno-histoquímica. Infecção bacteriana foi a causa mais detectada, encontrada em 16 de 53 amostras submetidas à análise bacteriana, seguida de causa viral em 2 de 105 amostras, e causas não infecciosas (isoeritrólise neonatal) em 2 de 105 amostras. Fungo foi encontrado em uma única amostra de 53 testadas. As bactérias isoladas mais frequentemente foram Escherichia coli, Enterobacter aerogenes, E. coli associada a Streptococcus spp., Staphylococcus spp. associado a Bacillus spp. Os seguintes agentes foram observados em uma única amostra cada: Arcanobacterium pyogenes, Streptococcus spp., Corynebacterium spp., Actinobacillus spp. e Rhodococcus equi. A identificação predominante de bactérias fecais e outras bactérias oportunistas, ao invés de outros patógenos comumente associados a quadros de abortamento equino, tais como Leptospira spp. e Herpesvírus equino tipo 1, sugere a necessidade de maior atenção no manejo higiênico das éguas em reprodução, a fim de prevenir infecções bacterianas que possam causar perda fetal, natimortalidade e mortalidade perinatal.(AU)

Occurrence of antibodies against Leptospira spp. in donkeys of São Paulo state / Ocorrência de anticorpos contra Leptospira spp. em asininos no estado de São Paulo

Among the diseases that affect equines, bacterial diseases play an important role from a health and economic point of view, especially leptospirosis and brucellosis. The study aimed to provide information on the occurrence of anti-Leptospira spp. and anti-Brucella abortus antibodies in donkeys of São Paulo state. We found a frequency of 62.4% (53/85) antibodies against Leptospira spp. The donkeys were not seropositive for Brucella spp.(AU)

Entre as doenças que acometem os equídeos, as enfermidades bacterianas assumem um papel importante do ponto de vista sanitário e econômico, destacando-se a leptospirose e a brucelose. O estudo teve como objetivo fornecer informações sobre a ocorrência de anticorpos anti-Leptospira spp. e anti-Brucella abortus em jumentos no estado de São Paulo. Estimou-se que 62,4% (53/85) dos animais apresentavam anticorpos anti-Leptospira spp. Os jumentos estudados não foram sororreagentes contra a Brucella spp.(AU)

Low occurrence of equine herpesvirus 1 (EHV-1) as cause of abortion and perinatal mortality in Brazil / Baixa ocorrência de herpes-vírus equino 1 (HVE-1) como causa de abortamento e mortalidade perinatal no Brasil

Equine herpesvirus type 1 (EHV-1) is an important pathogen that causes abortion, neonatal disease, respiratory disorders, and neurological syndrome in equine populations worldwide. To evaluate EHV-1 as a cause of abortion and perinatal mortality in Brazil, tissue samples from 105 aborted equine fetuses, stillbirths, and foals up to one month of age were examined using virus isolation, immunohistochemistry (IHC), histopathology, and nested polymerase chain reaction (PCR). Two fetuses were positive for EHV-1 by PCR, one of which showed syncytia and eosinophilic intranuclear inclusion bodies in bronchial epithelia, but it was negative by virus isolation. The other showed no characteristic histological lesions, but it was positive by viral isolation. No sample was positive by IHC. The results presented low occurrence of EHV-1 in the studied population and suggested that the use of a combination of techniques increases the likelihood of an accurate diagnosis of EHV-1.(AU)

O herpes-vírus equino tipo 1 (HVE-1) é um importante agente patogênico causador de aborto, doença neonatal, distúrbios respiratórios e síndrome neurológica em populações de equinos em todo o mundo. Para avaliar a ocorrência do HVE-1 como agente causal de abortamento e mortalidade perinatal no Brasil, foram examinadas amostras de 105 fetos equinos abortados, natimortos e potros de até 1 mês de idade, utilizando as técnicas de isolamento viral, imuno-histoquímica (IHQ), histopatologia e reação em cadeia da polimerase aninhada (nested-PCR). Dois fetos foram positivos na análise de PCR, e um deles apresentou corpúsculos de inclusão viral eosinofílicos e sincícios no epitélio brônquico, porém foi negativo na análise de isolamento viral. O outro feto não apresentou lesões histológicas características de infecção herpética, mas foi positivo na análise de isolamento viral. Nenhuma amostra apresentou resultado positivo pela análise de IHQ. Os resultados demonstraram baixa ocorrência de HVE-1 na população estudada e que o uso de diferentes técnicas diagnósticas aumenta a probabilidade de um diagnóstico preciso para o HVE-1.(AU)

Occurrence of viral diseases in donkeys (Equus asinus) in São Paulo State, Brazil / Ocorrência de enfermidades virais em asininos (Equus asinus) no estado de São Paulo, Brasil

Among the diseases that affect equines, viral diseases play an important role from a health and economic point of view, especially influenza, viral arteritis, herpes infections and vesicular stomatitis. In the Brazilian literature, there is little or no account of the occurrence of infectious diseases in donkeys. Given the importance of donkeys in different activities and the lack of information on infections that may occur in these animals, the aim of this study was to determine the frequency of anti-equine herpesvirus (EHV), anti-equine arteritis virus (EAV), anti-vesicular stomatitis, and anti-equine influenza (H3N8) antibodies in the serum of 85 donkeys bred in some regions of the state of São Paulo. We found the following antibody frequencies: 50.6% (43/85) antibodies against influenza virus subtype H3N8, 47% (40/85) anti-EHV, and 20% (17/85) anti-EAV. The donkeys were not seropositive for vesicular stomatitis. The results suggested that the agents EHV, EAV, and equine influenza subtype H3N8 circulate among donkeys in some regions of the state of São Paulo, Brazil, reinforcing the importance of establishing a routine diagnosis and epidemiological study of this species.(AU)

Dentre as doenças que acometem os equídeos, as enfermidades virais assumem um papel importante do ponto de vista sanitário e econômico, especialmente a influenza, arterite viral, as infecções herpéticas e a estomatite vesicular. Na literatura nacional, existe pouco ou nenhum relato sobre a ocorrência de enfermidades infecciosas nos asininos. Tendo em vista a importância dos asininos para diferentes atividades e a falta de informações sobre as doenças que acometem esses animais, este trabalho teve como objetivo estudar a frequência de anticorpos anti-EHV, antivírus da arterite equina, anti-estomatite vesicular e anti-influenza equina (H3N8) em 85 soros de jumentos criados no estado de São Paulo. Estimou-se que 50,6% apresentavam anticorpos contra o subtipo H3N8 do vírus da influenza; 47% (40/85) apresentavam anticorpos contra o EHV e 20% apresentavam anticorpos contra o vírus da arterite. Os jumentos não foram soro reagentes contra a estomatite vesicular. Os resultados obtidos sugerem que os agentes EHV, vírus da arterite equina e influenza equina subtipo H3N8, circulam entre os jumentos do estado de São Paulo, caracterizando a importância do estabelecimento de uma rotina diagnóstica e estudos epidemiológicos na espécie.(AU)

Occurrence of antibodies anti -Toxoplasma gondii, Neospora caninum and Leptospira interrogans in a captive deer herd in Southern Brazil / Ocorrência de anticorpos anti -Toxoplasma gondii, Neospora caninum e Leptospira interrogans em um rebanho de cervídeos de cativeiro do sul do Brasil

Abstract A large number of Brazilian zoos keep many endangered species of deer, however, very few disease surveillance studies have been conducted among captive cervids. Blood samples from 32 Brazilian deer (Blastocerus dichotomus, Mazama nana and Mazama americana) kept in captivity at Bela Vista Biological Sanctuary (Foz do Iguaçu, Brazil) were investigated for 10 ruminant pathogens, with the aims of monitoring deer health status and evaluating any potential zoonotic risk. Deer serum samples were tested for Brucella abortus, Leptospira (23 serovars), Toxoplasma gondii, Neospora caninum, bovine viral diarrhea virus, infectious bovine rhinotracheitis virus, foot-and-mouth disease virus, western equine encephalitis virus, eastern equine encephalitis virus and Venezuelan equine encephalitis virus. Antibodies against T. gondii (15.6%), N. caninum (6.2%) and L. interrogans serogroup Serjoe (3.1%) were detected. The serological results for all other infectious agents were negative. The deer were considered to be clinically healthy and asymptomatic regarding any disease. Compared with studies on free-ranging deer, the prevalences of the same agents tested among the captive deer kept at the Sanctuary were lower, thus indicating good sanitary conditions and high-quality management practices at the zoo.

Resumo Um grande número de zoológicos brasileiros abriga espécies de cervídeos ameaçados de extinção, entretanto, estudos de vigilância de doenças em cervídeos de cativeiro são escassos. Amostras de sangue de 32 cervídeos brasileiros (Blastocerus dichotomus, Mazama nana e Mazama americana), mantidos em cativeiro no Refúgio Biológico Bela Vista (Foz do Iguaçu, Brasil), foram investigados para 10 patógenos de ruminantes, visando monitorar o estado de saúde dos cervídeos e avaliar a presença de agentes zoonóticos. As amostras de soro foram testadas para Brucella abortus, Leptospira (23 sorovares), Toxoplasma gondii, Neospora caninum, diarreia viral bovina, rinotraqueíte infecciosa bovina, febre aftosa, encefalomielite equina do oeste, encefalomielite equina do leste e encefalomielite equina venezuelana. Foram detectados anticorpos para T. gondii (15,6%), N. caninum (6,2%) e para L. interrogans sorogrupo Serjoe (3,1%). As sorologias apresentaram resultado negativo para as demais doenças. Os cervídeos foram considerados clinicamente sadios e assintomáticos para doenças. Comparados aos estudos de populações de vida livre, as soroprevalências para os mesmos agentes testados foram menores para os cervídeos mantidos no Refúgio, indicando as boas condições sanitárias e a qualidade das práticas de manejo no zoológico.

Inquérito sorológico da infecção pelos vírus da encefalomielite equina no estado de Minas Gerais, Brasil / Serological survey of equine encephalomyelitis virus infection in the state of Minas Gerais, Brazil

Foi investigada a ocorrência da infecção pelos vírus da Encelafalomielite Equina do Leste (EEE), Encefalomielite Equina do Oeste (WEE) e Encefalomielite Equina Venezuelana (VEE) em equídeos não vacinados contra tais agentes, criados em dez delegacias regionais do estado de Minas Gerais (Almenara, Bambuí, Curvelo, Governador Valadares, Montes Claros, Oliveira, São Gonçalo do Sapucaí, Teófilo Otoni, Unaí e Viçosa), empregando-se a técnica de soroneutralização em microplacas. Dos 826 animais examinados, 30,2% ((250/826) foram soropositivos para EEE e 1,9% (16/826) para o zuelano de Encefalomielite Equina circulam na população equina do estado de Minas Gerais.

The occurrence of Equine Eastern Encephalomyelitis (EEE), Equine Western Encephalomyelitis (WEE) and Equine Venezuelan Encephalomyelitis (VEE) virus infection was investigated in equids not vaccinated against these viruses. The animals were distributed in ten regional districts of the state of Minas Gerais (Almenara, Bambuí, Curvelo, Governador Valadares, Montes Claros, Oliveira, São Gonçalo do Sapucaí, Teófilo Otoni, Unaí e Viçosa). Microplate serum neutralization test was used to detect antibodies against encephalitis virus. Two hundred and fifty animals (30.2%, 250/826) were EEE-seropositive, while 1.9% of them (16/826) were VEE-seropositive. No animals were found to be seropositive for WEE. In conclusion, either EEE or VEE viruses circulate in the equid population of the state of Minas Gerais.

Detection of anti-Toxoplasma gondii antibodies in carthorses in the metropolitan region of Curitiba, Paraná, Brazil / Detecção de anticorpos anti-Toxoplasma gondii em cavalos carroceiros da região metropolitana de Curitiba, Paraná, Brasil

Toxoplasma gondii, the agent for toxoplasmosis, has worldwide distribution. Horses normally play a secondary role in its life cycle, but movement around urban areas, feeding on grass and the increasing use of carthorses for gathering recyclable material in some urban areas of Brazil may increase their exposure to T. gondii infection. The aim of the present study was to investigate the frequency of anti-T. gondii antibodies in carthorses in the metropolitan region of Curitiba, PR. IgG antibodies against T. gondii were detected using the indirect fluorescence antibody test (IFAT) (titers ≥ 64). Seventeen (17.0%) of the 100 horses sampled were seropositive. There were no statistical differences in relation to sex (p = 0.28) or age (p = 0.15). Our findings suggest that carthorses are exposed to T. gondii infections and that no associations with age or sex exist.

Toxoplasma gondii, agente da toxoplasmose, tem distribuição mundial. Geralmente cavalos desempenham papel secundário no ciclo de vida do T. gondii. Entretanto, a circulação em meio urbano, a alimentação com gramíneas e o aumento no uso de cavalos carroceiros para recolhimento de material reciclável em algumas áreas urbanas do Brasil podem aumentar a exposição desses cavalos ao T. gondii. O objetivo deste estudo foi investigar a frequência de anticorpos anti-T. gondii em cavalos carroceiros da região metropolitana de Curitiba, PR. Os anticorpos da classe IgG contra T. gondii foram detectados pela reação de imunofluorescência indireta (RIFI) (títulos ≥ 64). Dezessete (17%) dos 100 cavalos avaliados foram positivos e não houve diferença entre sexos (p = 0,28) ou idade (p = 0,15). Esses achados sugerem que cavalos carroceiros estão expostos a infecções por T. gondii, não existindo associação com a idade ou o sexo dos animais.

Inquérito sorológico de lentiviroses de pequenos ruminantes (Maedi-Visna e artrite-encefalite caprina) no estado de São Paulo / Serologic survey of small ruminants lentiviruses (Maedi-Visna and caprine arthritis-encephalitis) in São Paulo state

O objetivo deste estudo foi determinar a frequência de animais soropositivos ao vírus da Maedi-Visna (MVV) em ovinos e ao vírus da CAE (CAEV) em caprinos criados no estado de São Paulo. Na pesquisa dos anticorpos séricos anti- MVV e anti-CAEV foi utilizada a técnica de imunodifusão em gel de ágar (IDGA). Dentre os ovinos estudados, 0,3% (4/1235) eram sororreagentes ao MVV e 15,1% caprinos (30/199) ao CAEV. Foi realizada a análise de fatores de risco associados à condição de propriedade positiva para CAEV e Maedi-Visna. Foram selecionadas variáveis para as duas enfermidades, no entanto, quando essas variáveis foram usadas na regressão logística múltipla, não foram identificados fatores de risco para as infecções. A infecção pelo CAEV no estado de São Paulo tem uma ampla disseminação e com uma alta prevalência enquanto que o MVV apresenta baixa prevalência. Ressalta-se a importância de medidas de prevenção e controle para diminuir a ocorrência da CAE e evitar a disseminação da Maedi-Visna.

The aim of this study was to carry out the serological occurrence of Maedi-Visna virus (MVV) and CAE virus (CAEV) in ovines and caprines breeding in São Paulo state. The test to detect MVV and CAEV antibodies was agar gel immunodiffusion (AGID). The detection of antibodies against MVV was 0,3% (4/1235) and against CAEV was 15,1% (30/199). Was carried analysis of risk factors associated with the presence of positive property for CAEV and Maedi-Visna. Variables were selected for both diseases, however, when these variables were used in multivariate logistic regression model were not identified risk factors for the infections. The CAEV infection in the São Paulo state has a wide spread and a high prevalence while MVV has low prevalence. It emphasizes the importance of prevention and control measures to reduce CAEV occurrence and prevent the spread of Maedi-Visna.

Neospora caninum as causative agent of bovine encephalitis in Brazil / Neospora caninum como agente causal de encefalite bovina no Brasil

For supporting the Brazilian bovine encephalitis surveillance program this study examined the differential diagnosis of Neospora caninum in central nervous system (CNS) by histological analysis (HE staining), immunohistochemistry (IHC), and nested-PCR using a set of primers from the Nc5 region of the genomic DNA and ITS1 region of the ribosomal DNA. A sample of 302 cattle presenting neurological syndrome and negative for rabies, aged 0 to 18 years, from herds in 10 Brazilian states was evaluated for N. caninum from January 2007 to April 2010. All specimens tested negative with IHC and nested-PCR using primers from the ITS1 region of ribosomal DNA, while two positive cases (0.66%) were found using primers from the Nc5 region of genomic DNA: a 20 month-old male and a 72 month-old female, both from São Paulo State. Only the male presented severe multifocal necrotizing encephalitis associated with mononuclear cell infiltration, a pathognomonic lesion caused by parasites of the family Sarcocystidae, and only this case was associated with N. caninum thus representing 0.33% positivity. Future studies should explore the association of IHC and nested-PCR with real-time PCR, a quantitative method that could be standardized for improving the detection of N. caninum in bovine CNS specimens.

Este estudo contribuiu para o programa de vigilância epidemiológica de encefalite bovina no Brasil realizando o diagnóstico diferencial de Neospora caninum no sistema nervoso central (SNC) por análise histológica (coloração HE), imunohistoquímica (IHC) e nested-PCR utilizando-se primers da região Nc5 do DNA genômico e da região ITS1 do DNA ribossomal. Um total de 302 amostras de bovinos com síndrome neurológica, negativos para raiva, na faixa etária de zero a 18 anos, provenientes de rebanhos de 10 estados brasileiros foi avaliada para N. caninum no período de janeiro/2007 a abril/2010. Todas as amostras foram negativas na IHC e na nested-PCR usando-se primers da região ITS1 do DNA ribossomal, enquanto dois casos (0,66%) foram positivos à nested PCR, usando-se primers da região Nc5 do DNA genômico: um macho de 20 meses de idade e uma fêmea de 72 meses de idade, ambos do Estado de São Paulo. Apenas o macho apresentou severa encefalite multifocal necrotizante associada com infiltrado inflamatório mononuclear, lesão patognomônica causada por parasitas da família Sarcocystidae, mostrando que apenas este caso de encefalite foi associado à infecção por N. caninum, representando 0,33% de positividade. Sugere-se em estudos futuros utilizar também a PCR em tempo real para detecção do parasito.

Detection of Neospora sp. antibodies in cart horses from urban areas of Curitiba, Southern Brazil / Detecção de anticorpos anti-Neospora sp. em cavalos de carroceiros de áreas urbanas de Curitiba, Sul do Brasil

Neospora caninum is a protozoan parasite which affects dogs as definitive hosts and several mammalian species as intermediate hosts mainly causing abortions and central nervous system disorders. The reemerging population of cart horses for carrying recycling material in urban areas of major cities in Brazil may have an impact on disease spreading, and these animals may be used as sentinels for environmental surveillance. Thus, the present study investigated the frequency of Neospora sp. antibodies in cart horses from Curitiba and surrounding areas, Paraná State, Southern Brazil. IgG antibodies against Neospora sp. were detected using indirect fluorescence antibody test (IFAT), and titers equal to or higher than 1:50 were considered reactive. Of all samples, 14/97 (14.4%) were positive: 2/29 (6.9%) were younger than 5; 5/26 (19.2%) between 6 and 9; and 6/31 (19.4%) older than 10 years of age. One of the 11 animals with unknown age was positive (9.1%). Cart horses are likely to be more exposed to dog feces and to Neospora sp. oocyst contamination in urban settings and a lower frequency of disease in dogs may have a negative impact on horse infection risk in these areas.

Neospora caninum é um protozoário parasita que afeta cães como hospedeiros definitivos e diversos mamíferos como hospedeiros intermediários, envolvido em abortos e distúrbios do sistema nervoso central. A população reemergente de cavalos de carroceiros utilizados para transportar material reciclável em áreas urbanas de grandes cidades brasileiras na disseminação de doenças, e estes animais podem ser utilizados como sentinelas para vigilância ambiental. Deste modo, no presente estudo foi investigada a frequência de anticorpos anti-Neospora sp. em cavalos de carroceiros da Região Metropolitana de Curitiba, Estado do Paraná, Sul do Brasil. Anticorpos da classe IgG anti-Neospora sp. foram detectados utilizando a reação de imunofluorescência indireta (RIFI), e títulos maiores ou iguais a 1:50 foram considerados reagentes. Do total de amostras testadas, 14/97 (14,4%) foram positivas: 2/29 (6,9%) tinham menos do que 5,5/26 (19,2%) entre 6 and 9, e 6/31 (19,4%) mais de 10 anos de idade. Um dos 11 animais positivos não tinha a idade conhecida (9,1%). Como cavalos de carroceiros possivelmente estejam mais expostos a oocistos de Neospora sp. em ambientes urbanos, uma baixa freqüência da doença em cães pode ter impacto negativo no risco de infecção de cavalos nestas áreas.

Ocorrência de leucoencefalomalácia (LEME) em equídeos no estado de São Paulo, Brasil: achados anatomopatológicos / Occurrence of leukoencephalomalacia in equids in São Paulo state, Brazil: anatomopathological findings

O trabalho relata a ocorrência de leucoencefalomalácia em equídeos (LEME) com sintomatologia nervosa e com diagnóstico negativo para raiva, herpesvírus equino e encefalomielite equina durante o período de dois anos, no Estado de São Paulo, Brasil. Foram examinadas 67 amostras de sistema nervoso central e em 10,4% (cinco equinos, um pônei e um asinino) observaram-se lesões macroscópicas de LEME, confirmadas pela análise histopatológica. Os animais acometidos eram cinco machos e duas fêmeas, com idades que variavam de 11 meses a nove anos. Os sete casos ocorreram tanto no inverno como em outras estações do ano. As principais manifestações clínicas relatadas foram incoordenação, ataxia, paralisia dos membros posteriores, profunda depressão, levando ao óbito. Macroscopicamente, observaram-se congestão dos vasos meníngeos, áreas de malácia da substância branca, caracterizadas por coloração amarelada e/ou hemorrágica, com cavitação e amolecimento circundados por hiperemia. As lesões microscópicas observadas em todos os casos eram de necrose de liquefação da substância branca do cérebro, caracterizada por substância eosinofílica amorfa e homogênea, presença de edema axonal e perivascular, hemorragia e vacuolização do neurópilo adjacente e esferoides axonais. Em algumas áreas de malácia havia também células Gitter. Em apenas um animal observou-se manguito perivascular mononuclear. O presente trabalho confirma que o diagnóstico diferencial é importante na distinção da LEME com outras neuropatias encefálicas que acometem equídeos. A ocorrência da LEME relatada neste estudo demonstra que esta enfermidade é importante para a equideocultura do Estado de São Paulo.

This article describes clinical and pathological findings of leukoencephalomalacia in equids with neurological signs which tested negative to rabies, equine herpesvirus and equine encephalomyelitis. This work was carried during the period of two years in São Paulo State, Brazil. A total of 67 brain samples were examined and in 10.4% (five equines, one poney, and one donkey) were observed gross lesions of ELEM, confirmed by histopathological analysis. The animals were five males and two females ranged from 11 months to nine years old. The seven cases happened in all seasons of the year. The most characteristic clinical signs were incoordination, ataxia, paralysis of the hind legs, profound depression and death. Necropsy was performed to collect brain samples for virological and histopathological diagnosis. Gross lesions included congestion of meningeal blood vessels, malacia of the white matter characterized by yellowish depressed areas sometimes hemorrhagic, with cavitations, and softening surrounded by hyperemic area. Microscopically, the lesions were liquefactive necrosis of the white matter brain, characterized by eosinophilic and amorphous material, axonal and perivascular edema, hemorrhage and vacuolization of the neuropil and axonal sferoids. Gitter cells were seen in some areas of malacia. Perivascular mononuclear cuffing was observed in only one case. The present study confirms that differential diagnosis is very important to distinguish equid neuropathies. The occurence of ELEM in the present study shows that the disease is important for the equideoculture in São Paulo State.

Inquérito sorológico da infecção por herpesvírus equino no estado de Minas Gerais / Serological survey of equine herpesvirus infection in Minas Gerais state

Os herpesvírus equinos tipo 1 (HVE-1) e 4 (HVE-4) são agentes causadores de diferentes formas de doença em cavalos, das quais as mais comuns são a rinopneumonite, o abortamento, a mortalidade perinatal e a mieloencefalopatia herpética equinas, que causam grandes perdas econômicas. Tem sido descrita mundialmente, havendo poucos estudos no Brasil. O objetivo do presente trabalho foi estudar a ocorrência e a distribuição da infecção por herpesvírus equinos (HVE) em equídeos criados em dez Delegacias Regionais do Estado de Minas Gerais: Almenara, Bambuí, Curvelo, Governador Valadares, Montes Claros, Oliveira, São Gonçalo do Sapucaí, Teófilo Otoni, Unaí e Viçosa. Foi utilizada a técnica de soroneutralização em microplacas com o intuito de detectar anticorpos soro neutralizantes. Das amostras analisadas, 17,6% (145/826) foram soropositivas para o HVE, sendo 18,7% (140/749) cavalos soropositivos, 6,8% (5/73) muares soropositivos e nenhum asinino soropositivo (0/4). Conclui-se que o HVE-1 encontra-se amplamente disseminado no Estado de Minas Gerais, pois todas as regiões estudadas apresentaram animais sororreagentes ao HVE-1. Observou-se maior ocorrência de anticorpos contra o HVE em animais adultos, indicando assim o potencial desses animais como fonte de infecção para os potros.

Equine herpesvirus type 1 (EHV-1) and 4 (EHV-4) are major pathogens affecting horses, and cause respiratory disease, abortion, perinatal mortality and neurological disease, bringing economical losses. This infection has been reported worldwide, but there are only a few studies in Brazil. The present study was undertaken in order to evaluate the occurrence and distribution of equine herpesviruses (EHV) infection in equids from ten regions of Minas Gerais State: Almenara, Bambuí, Curvelo, Governador Valadares, Montes Claros, Oliveira, São Gonçalo do Sapucaí, Teófilo Otoni, Unaí and Viçosa. To detect antibodies against EHV virus neutralization test in microplates was used. We found 17.6% (145/826) positive animals for EHV. 18.7% (140/749) positive horses, 6.8% (5/73) positive mules and none positive (0/4) donkeys. All ten regions studied showed animals reagents to EHV. The results suggest that EHV is widespread in equids of Minas Gerais State. It was observed a higher occurrence of antibodies against EHV in adult animals, indicating the potential of these animals as source of infection for foals.

Detection of equid herpesvirus 1 DNA by Polymerase Chain Reaction after experimental inoculation of horses with a Brazilian A4/72 strain / Detecção do DNA do herpesvírus eqüino 1 pela reação em cadeia pela polimerase em cavalos inoculados com a estirpe brasileira A4/72

Seven conventional adult horses were inoculated intranasally with a Brazilian A4/72 strain of equid herpesvirus-1 (EHV-1). In the first ten days after the inoculation, they showed signs of a mild, self limitin gupper respiratory tract infection. In spite of the presence of neutralizing antibodies before the trial, seroconversion was observed in some horses. The virus was not isolated from nasal swabs and peripheral blood leukocytes (PBL) of any of the horses. However,the EHV-1 was detected through the polymerase chain reaction (PCR)from PBL of all horses in the experiment within the third to the eighth day after the inoculation that illustrated the viremia. In addition,the PCR assay also detected the virus in bronchoalveolar lavage fluid samples starting on the ninth day after the experimental infection in most of horses. For that reason, as a diagnostic tool, the PCR assay showed higher sensitivity and specificity than the conventional laboratorial methods in detection of EHV-1.

Sete cavalos adultos de status sanitário convencional foram inoculados por via intranasal com a estirpe brasileira A4/72 do herpesvírus eqüino tipo 1 (EHV-1). Nos primeiros dez dias após a inoculação viral, todos os cavalos apresentaram manifestações de infecção respiratória leve erestrita às vias aéreas anteriores. Apesar de possuírem títulos de anticorpos neutralizantes antes da inoculação, alguns cavalos apresentaram soroconversão após o desafio viral. O EHV-1 não foi isolado a partir das secreções nasais e leucócitos sanguíneos periféricos(PBL) de nenhum animal. Entretanto, o DNA viral foi detectado pela reação em cadeia pela polimerase (PCR) nos PBL entre o terceiro e o oitavo dias pós-inoculação (d.p.i.) em todos os animais, indicando a ocorrência de viremia. Além disso, a prova de PCR detectou o vírus nas amostras do lavado broncoalveolar a partir do nono d.p.i. na maioria dos animais. Com base nos resultados obtidos, foi possível concluir que a PCR é uma técnica com alta sensibilidade e especificidade para o diagnóstico do EHV-1, capaz de detectar a presença do DNA viral mesmo quando não ocorre a constatação do agente pelos métodos tradicionais.

Experimental infection of vampire bats Desmodus rotundus (E. Geoffroy) maintained in captivity byfeeding defibrinated blood added with rabies vírus / Infecção experimental de morcegos hematófagos Desmodus rotundus(E. Geoffroy) mantidos em cativeiro e alimentados com sangue desfibrinado adicionado de vírus da raiva

In vampire bats, food sharing behavior would contribute for the oral transmission of rabies virus among the roostmates. To test this hypothesis, 10 captive Desmodus rotundus bats were fed defibrinateds wine blood containing mice brain suspension of PV-strain of rabies virus. Other 10 bats were fed blood mixed with a mice brain suspension of T-9/95 vampire-bat-field isolate of rabies virus. Another group of 10 bats was inoculated intramuscularly with a mice brain suspension of the T-9/95 isolate. Other 20 bats were maintained without treatment and fed defibrinated swine blood for 158 days. All animals found dead during the observation period or those sacrificed at the end of the experiment were necropsied and specimens such as the brain and non-nervous tissues were collected for rabies examination. Four bats inoculated intramuscularly developed clinical rabies, with signs lasting 1-2 days, and the survival periods ranged from 11-14 days. The initial rabies diagnosis was based on direct fluorescent antibody (dFA) and mouse inoculation test (MIT) performed only on brain specimens, and subsequently, brains andthe non-nervous materials were further reexamined by means of dFA, MIT and heminested-polymerase chain reaction (ht-PCR)technique. The intake of the PV-strain caused rabies in 2 bats, with survival period of 25 and 32 days, while the three bats ingesting theT-9/95 isolate presented periods of 26-31 days. Although discrepant results were found among the diagnostic tests, viruses have disseminated to the central nervous system and other organs, as seenin bats inoculated intramuscularly

Em morcegos hematófagos, o hábito de compartilhar alimentopoderia contribuir na transmissão oral do vírus da raiva. Para verificar esta hipótese, 10 morcegos Desmodus rotundus em cativeiro foram alimentados com sangue suíno desfibrinado, contendo suspensão de cérebros de camundongos infectados com vírus rábico PV. Outros 10 camundongos receberam sangue contendo suspensão cerebral de camundongos infectados com vírus de morcego hematófago (T-9/95). Um grupo de 10 camundongos foi inoculado intramuscularmente com suspensão de vírus T-9/95. Outros 20 morcegos foram mantidossem tratamento e alimentados com sangue desfibrinado por 158 dias. Todos os animais encontrados mortos durante o período de observação ou sacrificados no final do experimento foram necropsiados e os cérebros e órgãos não-nervosos foram colhidos para a confirmação da raiva. Quatro morcegos inoculados intramuscularmente apresentaram raiva clínica, com sinais persistind opor 1-2 dias e os períodos de sobrevivência variaram de 11-14 dias. O diagnóstico da raiva inicialmente foi realizado somente com os fragmentos do cérebro, submetendo-os às provas de imunoflurescência direta (IFD) e inoculação em camundongos (IC).Subseqüentemente, os cérebros e os órgãos não-nervosos foram reexaminados com as técnicas de IFD, IC e heminested-polymerase chain reaction (ht-PCR). A ingestão do vírus PV causou raiva em dois morcegos, com período de sobrevivência de 25 e 32 dias, enquanto que os três morcegos que ingeriram o isolado T-9/95 apresentaram períodos de 26-31 dias. Embora encontrando resultados discrepantes entre as técnicas diagnósticas utilizadas, os vírus ingeridos pelos morcegos foram detectados no sistema nervoso central e outros órgãos não-nervosos, como nos morcegos inoculados intramuscularmente

Bat rabies in the north-northwestern regions of the state of São Paulo, Brazil: 1997-2002

OBJECTIVE: Reports on bat rabies in Brazil are sporadic and isolated. This study aimed at describing the detection of rabies virus in bats in the state of São Paulo. METHODS: A total of 7,393 bats from 235 municipalities of the north and northwestern areas of the state of São Paulo, Southeastern Brazil, were assessed according to their morphological and morphometric characteristics from 1997 to 2002. Fluorescent antibody test and mice inoculation were used for viral identification. RESULTS: Of all samples examined, 1.3 percent was rabies virus positive, ranging from 0.2 percent in 1997 to 1.6 percent in 2001. There were found 98 bats infected, 87 in the urban area. Fluorescent antibody test was detected in 77 positive samples, whereas 92 produced rabies signs in mice; incubation period ranging from 4 to 23 days. In 43 cities at least one rabid bat was observed. The highest proportion (33.7 percent) of rabies virus was found in Artibeus lituratus. Eptesicus and Myotis were the most frequent positive species (24.5 percent) of the Vespertilionidae family. The species Molossus molossus and Molossus rufus showed 14.3 percent positive bats. There were no differences in the distribution of positive rabies between females (33; 48.5 percent) and males (35; 51.5 percent). CONCLUSIONS: Rabies-infected bats were found in environments that pose a risk to both human and domestic animal population and there is a need for actions aiming at the control of these species and public education.

OBJETIVO: Os relatos sobre a ocorrência de raiva em morcegos no Brasil são esporádicos e isolados. Assim, o objetivo do estudo foi descrever a detecção do vírus da raiva em morcegos do Estado de São Paulo. MÉTODOS: Foram analisados 7.393 morcegos provenientes de 235 municípios do norte e noroeste do Estado de São Paulo, no período de 1997 a 2002 e identificados por meio de características morfológicas e morfométricas. Para a detecção do antígeno viral foi utilizada a técnica de imunofluorescência direta e o isolamento do vírus foi realizado por inoculação em camundongos. RESULTADOS: Das amostras examinadas, 1,3 por cento foram positivas para raiva, com variação de 0,2 por cento em 1997 a 1,6 por cento em 2001. Foram encontrados 98 morcegos com o vírus, 87 deles em área urbana. O vírus da raiva foi detectado pela imunofluorescência direta em 77 do total de amostras positivas, enquanto 92 produziram doença em camundongos inoculados e o período de incubação variou entre 4-23 dias. Em 43 municípios foi encontrado pelo menos um morcego positivo. Entre as espécies analisadas o vírus da raiva foi detectado com maior freqüência (33,7 por cento) em Artibeus lituratus. Os vespertilionideos do gênero Eptesicus e Myotis totalizaram 24,5 por cento dos morcegos positivos e as espécies do gênero Molossus (Molossus molossus e Molossus rufus), 14,3 por cento. A distribuição do vírus da raiva foi semelhante entre fêmeas (33; 48,5 por cento) e machos (35; 51,5 por cento). CONCLUSÕES: Morcegos positivos para raiva foram encontrados em situações que colocam em risco tanto a população humana como animais de estimação, exigindo medidas voltadas para o manejo destas espécies e de educação da população.

Soroprevalência da encefalomielite eqüina do leste e do oeste no Município de Uruará, PA, Brasil / Seroprevalence of holders farms for eastern equine encephalitis and western equine encephalomyelitis in Uruará Municipality, Pará State, Northen Brazil

O objetivo do presente foi estimar a soroprevalência de anticorpos contra o vírus da EEE e da WEE utilizando como unidades de análise os eqüídeos e as propriedades rurais do tipo familiar do município de Uruará, PA. Os anticorpos contra o vírus das EEE e da WEE foram pesquisados pela microtécnica de soroneutralização. As seguintes prevalências de animais sororeatores para os diferentes vírus foram observadas: EEE 27,37% (IC 15,33 - 39,21%), WEE 1,05% (IC 0,06 - 6,78%). Para as propriedades obtivemos as seguintes prevalências: EEE 53,12% (IC 35,03 - 70,49%), WEE 3,12% (IC 0,16-18,00%).

The aim of this study was to verify the prevalence of herds with EEEV and WEEV infected animals, in Uruará municipal district, Pará State-Brazil. In view of that, the serum neutralization test was utilized. The following prevalence of positive herds were observed: 17 positive herds for EEEV out of 32 herds, therefore, prevalence is 53.12% (IC 35.03 - 70.49%). One positive herd was found for WEEV out of the 32 studied herds, thus performing 3.12% (IC 0.16 - 18.00%) prevalence. The prevalence of serum reactors animals were observed: 27,37% (IC 15,33 - 39,21 %), WEE 1,05% (IC 0,06 - 6,78%).

Diagnóstico laboratorial da raiva na região oeste do Estado de São Paulo / Laboratory diagnosis of rabies in the west region of São Paulo State

O laboratório do Pólo da Alta Sorocabana, Presidente Prudente, SP e Instituto Biológico de São Paulo, SP, realizaram avaliacão do diagnóstico laboratorial da raiva no período de 1996 a 2003 na região oeste do Estado de São Paulo. Para tal, se fez uso dos testes de imunofluorescência direta e prova biológica (inoculacão em camundongos) em 4.950 amostras encaminhadas para análise envolvendo as espécies canina, felina, bovina, quiróptera (morcego) e outras (eqüina, caprina, suína e roedores). Detectou-se a presenca de 74 amostras positivas, sendo que destas, 58 (78,4 por cento) foram referentes a quirópteros não hematófagos e 16 (21,6 por cento) para bovinos. O presente estudo epidemiológico constatou que, apesar do alto índice de positividade nos quirópteros, não houve um surto de raiva nestas espécies na região de Presidente Prudente no período estudado, porque o aumento no índice de positividade foi decorrente do significativo aumento de amostras de quirópteros encaminhadas ao laboratório para pesquisa do vírus rábico.

Soroprevalência da anemia infecciosa eqüina, da arterite viral dos eqüinos e do aborto viral eqüino no município de Uruará, PA, Brasil / Seroprevalence of equine infection anemia, equine viral arteritis and equine viral abortion in Uruará municipality, Pará state, Brazil

Os vírus da anemia infecciosa eqüina (VAIE), da arterite viral dos eqüinos (VAVE) e do aborto viral eqüino (Herpesvírus eqüino tipo 1, HVE-1) säo agentes causadores de enfermidades nos eqüídeos que podem causar graves prejuízos econômicos. O objetivo do presente trabalho foi estimar a soroprevalência de anticorpos contra os vírus VAIE, VAVE e HVE-1, utilizando como unidades de análise os eqüídeos e as propriedades rurais do tipo familiar do município de Uruará, PA. Os anticorpos contra o VAIE foram pesquisados pela prova de imunodifusäo em gel de ágar e os anticorpos contra o VAVE e o HVE-1 pela prova de soroneutralizaçäo. O tamanho da amostra foi estimado a partir de um total de 2069 propriedades, caracterizadas por agricultura familiar e ausência de vacinações contra o VAVE e o HVE-1. Foi adotado um nível de confiança de 90 por cento, com uma precisäo de 15 por cento e prevalência estimada de 50 por cento. As seguintes prevalências de animais soro reatores para os diferentes vírus foram observadas: VAIE: 17,71 por cento (IC 10,67 - 26,83 por cento); HVE-1: 17,71 por cento (IC 10,67 - 26,83 por cento) e VAVE: 0,00 por cento (IC 0,00 - 3,77 por cento). As seguintes prevalências de propriedades com pelo menos um animal soro reator para os diferentes vírus foram observadas: VAIE: 53 por cento (IC 38,12 - 68,12 por cento); HVE-1: 40.62 por cento (IC 25.96 - 56.65 por cento) e VAVE: 0 por cento (IC 0 - 6.94 por cento)